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恒奧德倒置生物顯微鏡工作原理選型、操作與維護(hù)
點(diǎn)擊次數(shù):175      更新時間:2026-03-02

 

倒置生物顯微鏡工作原理選型、操作與維護(hù)

 

折射和折射率

光線在均勻的各向同性介質(zhì)中,兩點(diǎn)之間以直線傳播,當(dāng)通過不同密度介質(zhì)的透明物體時,則發(fā)生折射現(xiàn)象,這是由于光在不同介質(zhì)的傳播速度不同造成的。當(dāng)與透明物面不垂直的光線由空氣射入透明物體 (如玻璃)時,光線在其介面改變了方向,并和法線構(gòu)成折射角。

透鏡是組成顯微鏡光學(xué)系統(tǒng)的最基本的光學(xué)元件,物鏡目鏡及聚光鏡等部件均由單個和多個透鏡組成。依其外形的不同,可分為凸透鏡(正透鏡)和凹透鏡(負(fù)透鏡)兩大類。

當(dāng)一束平行于光軸的光線通過凸透鏡后相交于一點(diǎn),這個點(diǎn)稱"焦點(diǎn)",通過焦點(diǎn)并垂直光軸的平面,稱"焦平面"。焦點(diǎn)有兩個,在物方空間的焦點(diǎn),稱"物方焦點(diǎn)",該處的焦平面,稱"物方焦平面";反之,在象方空間的焦點(diǎn),稱"象方焦點(diǎn)",該處的焦平面,稱"象方焦平面"。

光線通過凹透鏡后,成正立虛像,而凸透鏡則成正立實(shí)像。實(shí)像可在屏幕上顯現(xiàn)出來,而虛像不能。

凸透鏡成象規(guī)律

1. 當(dāng)物體位于透鏡物方二倍焦距以外時,則在象方二倍焦距以內(nèi)、焦點(diǎn)以外形成縮小的倒立實(shí)象;

2. 當(dāng)物體位于透鏡物方二倍焦距上時,則在象方二倍焦距上形成同樣大小的倒立實(shí)象;

3. 當(dāng)物體位于透鏡物方二倍焦距以內(nèi),焦點(diǎn)以外時,則在象方二倍焦距以外形成放大的倒立實(shí)象;

4. 當(dāng)物體位于透鏡物方焦點(diǎn)上時,則象方不能成象;

5. 當(dāng)物體位于透鏡物方焦點(diǎn)以內(nèi)時,則象方也無象的形成,而在透鏡物方的同側(cè)比物體遠(yuǎn)的位置形成放大的直立虛象。

 

選型、操作與維護(hù)

選型

倒置生物顯微鏡的選型需根據(jù)具體實(shí)驗需求進(jìn)行綜合考量。應(yīng)優(yōu)先選用長工作距離物鏡,選擇時需綜合計算物鏡工作距離、培養(yǎng)瓶底部厚度與液層高度,并預(yù)留安全余量。針對較厚的培養(yǎng)器皿,建議選用工作距離更大的長工作距離物鏡。若需進(jìn)行長時間活細(xì)胞觀測或拍攝,應(yīng)選擇配備溫控與CO?維持系統(tǒng)的顯微鏡以維持細(xì)胞活性。根據(jù)實(shí)驗發(fā)展需求,可考慮選擇支持模塊化擴(kuò)展的機(jī)型,便于未來升級熒光、相差增強(qiáng)等高級功能 [33]。

操作

操作時,調(diào)焦應(yīng)先粗調(diào)至培養(yǎng)瓶底反光面,再緩慢向上微調(diào)找到細(xì)胞層,力度需輕柔以避免物鏡頂碎培養(yǎng)瓶。進(jìn)行相差觀察時,必須確保聚光鏡的相差環(huán)與物鏡的放大倍數(shù)及相位類型匹配,切換物鏡時需同步調(diào)整聚光鏡上的相差環(huán)至對應(yīng)位置,并避免在活細(xì)胞觀察中使用油鏡以防培養(yǎng)液污染鏡頭。顯微鏡的清晰度核心取決于物鏡的數(shù)值孔徑而非單純放大倍數(shù),有效放大倍率約等于物鏡數(shù)值孔徑乘以1000,常規(guī)細(xì)胞觀察一般100倍至200倍已足夠 [33]。倒置熒光顯微鏡通常只會配40倍物鏡,因此放大倍率、分辨率不如正置熒光顯微鏡